Kako izbjeći uobičajene nesporazume u korištenju savjeta s nisko veznim pipetama?

Savjeti za pipetu s niskim vezama može značajno smanjiti ostatke uzorka zbog svog hidrofobnog dizajnerskog dizajna unutarnje površine, a posebno su prikladni za rukovanje skupim reagensima, viskoznim tekućinama ili uzorcima u tragovima (poput proteina i nukleinskih kiselina). Međutim, ako se ne rade pravilno, oni i dalje mogu utjecati na točnost i ponovljivost eksperimenta. Slijedi analiza uobičajenih pogrešaka i rješenja koja se koriste u kombinaciji s laboratorijskim operativnim specifikacijama:

Nesporazum 1: Zanemarivanje prethodnog ispratića savjeta

Pogrešan rad: izravno aspirirajte uzorak i izostavite korak unaprijed isprati.

Utjecaj: Iako savjeti s pipetama s niskim vezama mogu smanjiti ostatke, za uzorke poput seruma, proteina ili organskih otapala, njihovi unutarnji zidovi i dalje mogu tvoriti mikro-tekući film zbog površinske napetosti, što rezultira niskim početnim volumenom pipeta.

Ispravan pristup: Prije formalnog pipeta, ponovite aspiraciju-prasak 2 do 3 puta s istim uzorkom kako biste formirali stabilni tekući filmski sloj na unutarnjem zidu vrha (osim za tekućine visokotemperaturne/niske temperature).

Nesporazum 2: Brzina težnje je prebrza ili je kut nagnuta

Pogrešan rad: Aspirate tekućinu brzo ili pipeta nagne više od 20 °.
Utjecaj:

Pipeta prebrzo: mjehurići ili usisavanje leđa (tekućina upada u pipetu i onečišćuje klip);
Pipeta je nagnula: Promjena tlaka površinske tekućine, što rezultira netočnim volumenom pipeta i povećanim zaostalim volumenom. Ispravan pristup:
Pipete polako i polako oslobađajte: djelujte konstantnom brzinom i kontrolirajte brzinu oslobađanja klipa;
Držite okomito: Držite kut nagiba ≤20 ° kada je vrh pipete uronjen u tekuću površinu.
Nesporazum 3: Zanemarivanje operativnih razlika viskoznih tekućina
Pogrešan rad: Upotrijebite istu brzinu pipke kao i obične tekućine za uzorke visoke viskoznosti (poput glicerola i staničnih suspenzija).
Utjecaj: viskozne tekućine polako teče na unutarnjem zidu vrha pipete, a brzo pražnjenje uzrokovat će značajno povećanje zaostalog volumena, nadoknađujući prednosti niskog adsorpcijskog dizajna.
Ispravan pristup:

Produžite vrijeme uranjanja: Ostanite u tekućoj površini 1 sekundu nakon aspiracije prije nego što ga uklonite i pauzirajte 1 sekundu prije nego što pritisnete drugi zupčanik da biste puhali tekućinu prilikom ispuštanja;
Odaberite vrh pipete širokog usta: za makromolekule ili uzorke ćelije koristite vrh pipete s niskom adsorpcijom širokog usta (70% veći od standardnog otvora) za smanjenje sile smicanja.
Zabluda 4: snažno udaranje prilikom instaliranja savjeta
Pogrešan operacija: opetovano udaranje ručice pipete kako bi se "stegnuo" vrh.
Učinak: Dugoročni utjecaj nosit će komponente brtvljenja pipete, uništiti nepropusnost i uzrokovati pogrešku istjecanja ili volumena.
Ispravna metoda: Umetnite pipetu okomito u vrh, lagano pritisnite i lagano zakrenite lijevo i desno prema stanu.

Zabluda 5: Netočno skladištenje ili ponovna upotreba
Pogrešan rad:

Stavite pipetu ravno kad u vrhu ima zaostale tekućine;
Ponovno upotrijebite savjete za nisku adsorpciju za jednokratnu upotrebu kako biste uštedjeli troškove. Utjecaj:
Stavljanje ravnih uzroka povratnog protoka tekućine da korodira oprugu klipa;
Ponovna upotreba može utjecati na točnost zbog unakrsne kontaminacije ili strukturne deformacije. Ispravna metoda:
Odbacite savjet odmah nakon pipetiranja i visete pipetu okomito;
Ponovna upotreba je strogo zabranjena, pogotovo kada je riječ o osjetljivim eksperimentima poput PCR -a i izotopa.
Profesionalni savjet: maksimizirajte prednosti savjeta o niskom zadržavanju
Uskladite svojstva tekućina:
Vapljive tekućine (poput kloroforma): Izbjegavajte korištenje običnih vrhova niskog zadržavanja i koristite vrhove sigurnih otapala ili vanjske klipne pipete dizajnirane za hlapljive reagense.
Provjera kalibracije:
Redovito odmjerite težinu čiste vode pipeta s analitičkom ravnotežom (1ml = 0,9982 g pri 20 ℃) ​​kako biste provjerili ispunjava li stvarni volumen standard.
Sažetak ključnih točaka: Savjeti za nisko zadržavanje poboljšavaju točnost smanjenjem gubitka uzorka, ali ako se detalji operacije zanemaruju, možda će biti kontraproduktivni. Standardizirana instalacija, kontrola brzine, prilagodba karakteristikama uzoraka i stroga jednokratna upotreba osnova su za postizanje eksperimenata visoke ponovljivosti.